南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物：如何选择免疫胶体金银细胞化学染色实验中的固定剂

阅读次数：16141 发布时间：2016/4/16 22:06:42

要想获取良好的免疫胶体金银染色效果，首先取决于标本的处理是否恰当，其次是给高特异性和高效价的一抗选择*佳的稀释度。

由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能有一种适用于所有抗原的固定剂，而是根据不同的抗原性质区别对待。

一、固定剂的选择及固定时间（详见表5-9）

（1）Karovsky＇s 液pH7.3。

（2）PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative）

表5-9 各种抗原固定剂的选择及固定时间

待检抗原	固定剂的种类	固定时间
蛋白质
酶	冰冻切片不固定，或用95%乙醇，B₅固定液	10 min
激素	冰冻切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲	10 min
激素	醇，乙醇，PEG固定，B₅固定液固定	4^℃30 min
免疫球蛋白	中性福尔马林，四氯化碳（1%甲醛）	30 min
白蛋白	95%乙醇含1～5%冰醋酸	30 min
纤维蛋白元	同上	30 min
病毒	丙酮，100%乙醇，甲醇，	30 min
糖蛋白	PLP，丙酮	30 min
脂质Forssman	中性福尔马林	20 min
抗原	2.5%硫代硫酸钠，冰冻切片不固定	20 min
免疫电镜	PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3）PEG、ECD-G等	30min

二、切片的处理与粘附。

免疫组化染色过程较长，洗的次数很多，而且均在振荡洗涤，抗原片附贴不紧，往往在*后的时刻，还没有等显色就会脱落导致前功尽弃，这个环节　虽小却会影响大局，因此，为了保证切片染色成功必须把切片处理好，解除掉片的后顾之忧。

保存完好的抗原性和组织结构是染色成功的基础，本文根据个人实验使用经验总结了染色中原固定剂的选择及固定时间，供大家参考。
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