南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物：在活细胞水平监控蛋白相互作用

阅读次数：16090 发布时间：2016/5/26 22:36:16

研究蛋白相互作用的传统方法通常是在体外开展的，只使用了蛋白片段，无法在细胞环境的背景下提供数据。然而，检测结果欠缺在细胞水平的验证而缺乏说服力，还需要进行细胞学检测来验证。而对于NanoBRET™ 蛋白相互作用分析，研究人员能够利用全长的蛋白质，在活细胞水平研究蛋白相互作用的诱导和抑制。

BRET的原理是：当两个蛋白分子相互作用，一个蛋白融合表达的供体萤光素酶蛋白（传统使用Renilla 海肾萤光素酶）酶学反应所产生的发光信号光谱与另一个蛋白标记的受体荧光基团的激发光谱相重叠，诱发受体分子发出荧光。与荧光共振能量转移（FRET）相比，BRET不需要激发光，背景更低。

NanoBRET™ 分析是大幅度改良的BRET 分析平台，使用NanoLuc® 萤光素酶作为能量供体，而HaloTag蛋白标记的NanoBRET™ 618 荧光基团作为受体。来自NanoLuc 供体的明亮蓝移发光信号耦合到远红移的HaloTag 受体上后，光谱叠加更佳、信号更强，背景更低。

与传统的BRET方法相比，NanoBRET™ 分析中作为供体的型NanoLuc® 萤光素酶蛋白光信号更强，与受体荧光基团的波长配对更理想。它使用的Flexi载体技术进行克隆，更简单省时。同时，Promega提供商品化预构建载体，可节省自行构建载体的时间，应用更方便。

Flexi 载体克隆系统是基于两个稀有酶切位点的限制性内切酶，SgfI和PmeI，这种技术能够快速、高效、高保真性地在不同 Flexi. 载体间转移蛋白编码区，而无需重新测序。NanoBRET™ PPI Flexi Starter System 提供了以Flexi 载体系统为基础进行蛋白相互检测的解决方案，包括载体，检测试剂及阳性对照。

另外一个自行构建载体的解决方案是NanoBRET™ PPI MCS Starter System。这个试剂盒提供带多克隆位点的NanoLuc® 融合蛋白克隆载体和HaloTag® 融合蛋白载体，检测试剂以及阳性对照。

当然，你也可以选择预构建载体。NanoBRET™ 预构建载体融合了已知相互作用的蛋白的基因，无需你自行再构建载体，可直接用于转染构建细胞模型，配合检测试剂即可进行药物作用机理及其他相关的机制研究。省时省力，结果更有保证。

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