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阅读次数：16069 发布时间：2016/11/29 11:15:34
固定化金属亲和层析（IMAC）是蛋白纯化的常用方法，特别适用于纯化多组氨酸（His）标签融合蛋白 。金属离子通过螯合剂（配体）固定到基质上，与多组氨酸标签相互作用 ，有效的螯合样品中的融合蛋白。氮川三乙酸（NTA）和亚氨基二乙酸（IDA）是商业化树脂中经常使用的螯合配基。怎样选择合适的配基和金属离子，应用于蛋白纯化实验呢？
一些还原剂会影响IDA、NTA的性能。比如DTT会使金属离子从IMAC 树脂上剥落 ，常常会使树脂的颜色变为棕色；EDTA对配基的影响更大 。但实验显示，NTA耐受各类化学试剂的能力明显优于IDA。
总结起来，选用IMAC纯化蛋白前，得先问这几个问题：
1.蛋白纯度 、蛋白载量 ，哪个是你的目标？
2.你的样本中是否包含一些还原试剂如DTT或EDTA ？
3.你的预算是 ？
如果你只是想得到高的蛋白产量 ，对纯度的要求稍微低点，IDA结合的树脂可能是你正确的选择。如果想限度的减少非特异性结合 ，可以使用Zn2+ 或Co2+结合树脂。从各类数据来看，NTA结合树脂都表现出极大的优越性 。而Ni-NTA树脂则相当于His标签蛋白纯化的行业标准！
不同的样本或许纯化的条件不尽相同，但以上*基本的原则不同样本都是适用的。
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