025-66060117
订购热线
025-66060117
订购热线
阅读次数 ：16250 发布时间：2017/2/8 16:15:15
(一)、ABC法 ：(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行)1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。
2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。
3. 无水酒精Ⅰ 30秒。
4. 无水酒精Ⅱ 30秒。
5. 95%酒精Ⅰ 30秒。
6. 95%酒精Ⅱ 30秒 。
7. 90%酒精 30秒 。
8.80%酒精 30秒。
9. 70%酒精 30秒。
10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是1-10)
11.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。
12.水洗。
13.抗原修复。
14.PBS洗3次，1分钟/次。
15.加入血清孵育20分钟。
16.摔干血清 ，加入一抗60分钟。
17.PBS洗3次，2分钟/次 。
18.加入二抗孵育30分钟。
19.PBS洗3次，2分钟/次 。
20.加入ABC复合物，孵育30分钟 。
21. PBS洗3次 ，2分钟/次 。
22.DAB-H2O2孵育切片5-10分钟。
23.PBS洗，水洗 。
24.Harris苏木素染核5-10分钟。
25.水洗，分化，蓝化 ，脱水，透明并封固。
(二)、LSAB法 。(SP法)(Labelled streptavidim biotln)
1.切片脱蜡至水 。
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟 。
3.水洗 。
4.抗原修复 。
5.PBS洗3次 ，1分钟/次。
6.加入血清孵育10分钟 。
7.摔去血清 ，加入一抗孵育30-60分钟。
8.PBS洗3次，每次2分钟。加入二抗，孵育20分钟。
9.PBS洗3次 ，每次2分钟。
10.加入SP复合物孵育20-30分钟。
11.PBS洗3次，每次2分钟 。
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟 。
13.PBS洗 ，水洗。
14.Harris苏木素染核5-10分钟。
15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固 。
(三)真空负压LSAB法
1.切片脱蜡至水 。
2. 0.3%H2O2甲醇真空负压处理5min.
3. 水洗 。
4.如果需要 ，可进行抗原修复。
5.PBS洗3次，每次1分钟。
6.加入正常血清真空负压处理5min 。
7.摔干血清，加入抗体 ，真空负压处理5分钟。
8. PBS洗3次，每次2分钟。
9. 加入二抗(即连接抗体)真空负压处理5分钟。
10.PBS洗3次 ，每次2分钟。
11.加入链卵蛋白复合物，真空负压处理 5分钟。
12.PBS洗3次，每次2分钟。
13.DAB-H2O2孵育5-10分钟 。
14.PBS洗 ，水洗。
15.染核，分化，蓝化，脱水，透明并封固 。
注：真空负压即将真空干燥中抽成真空 。负压达66.7KPa(500mmHg)
原创作者：南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司
COPYRIGHT 2003-2004 南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司 ALL RIGHTS RESEVED 技术支持： ICP备案号 ：苏ICP备16008122号-1
