单核巨噬细胞在各种内源性和外源性介质的作用下激活后分泌IL-10，如LPS(通过激活TLR4,TRAF3,NF-κBp65/p50,和ERK激酶) 、儿茶酚胺(通过激活蛋白激酶A和CREB-1/ATF-1)引起IL-10基因转录。单核巨噬细胞在清除凋亡细胞过程中也会分泌IL-10 ，这一过程依赖于CD36和p38丝裂原激活蛋白(MAP)激酶 ，除了转录水平，等*近认为IL-10也被microRNA在转录后期所调节。
操作步骤：
1. 标准品的稀释 ：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
1000pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
500pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
250pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
125pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
62.5pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待
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3
测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50μl ，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 然
后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟 。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液 ，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干 。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5 。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl ，再加入显色剂B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。测定应在加终止液
后15 分钟以内进行。
检测范围 ：
30pg/ml -1000pg/ml
