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大鼠Salusin β ELISA试剂盒使用说明!

阅读次数 :16051    发布时间:2018/7/31 13:31:12

大鼠Salusin β  使用说明 !


实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠Salusin β 水平。用纯化的大鼠Salusin β 抗体包被微孔板 ,制成固相抗体,往包被抗的微孔中依次加入Salusin β,再与HRP 标记的Salusin β 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色 。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色 。颜色的深浅和样品中的Salusin β 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)  ,通过标准曲线计算样品中大鼠Salusin β 浓度 。


操作步骤

1. 标准品的稀释 :本试剂盒提供原倍标准品一支 ,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
8pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
4pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
1pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样 :分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl ,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁 ,轻轻晃动混匀 。

3. 温育 :用封板膜封板后置37℃温育30 分钟 。

4. 配液 :将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体 ,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次 ,拍干 。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外 。


大鼠Salusin β  ELISA试剂盒使用说明!

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色 :每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl ,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.


10. 终止 :每孔加终止液50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零 ,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。


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