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阅读次数 ：17504 发布时间：2018/8/9 15:50:24
丙二醛(MDA)试剂盒原来是这样操作的！丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标 ，在酸性和高温度条件下 ，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3 ，5，5—三甲基恶唑-2 ，4。二酮)，其zui大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中zui主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的zui大吸收波长在450nm ，但532nm处也有吸收 。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532 、450nm处的消光度值，所以在蔗糖 、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积 ，加入Fe3+的终浓度为0．5umol·L-1 。
双抗体夹心法
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜 。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样 ：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时 。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体 ：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色 ：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定 ：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅 ，依据所呈颜色的深浅，以“+” 、“-”号表示。也可测OD值 ：在ELISA检测仪上 ，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值 ，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍 ，即为阳性。
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