5357cc拉斯维加斯首页入口生物6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶低价促销
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6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6 - phosphogluconate dehydrogenase ， 6-PGDH）活性测定试说明书（50T/48S）
测定意义：
磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关 。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
测定原理：
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH ，NADPH在430 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性 。
自备和用品：
紫外分光光度计、低温、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水 。
试剂组成和配置：
试剂一 ：液体×1瓶 ，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制 ，加入5 mL试剂一，混匀。
试剂三 ：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。
粗酶液提取 ：
称约0.1g组织 ，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min ，取上清液，待测 。
测定：
1. 分光光度计预热30min以上 ，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一置于25℃或者37℃水浴预热30 min以上。
3. 空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂二 ，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1 ，第180s吸光值记为A2。
4. 测定管：取1mL石英比色皿 ，依次加入100μL粗酶液，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化 ，第10 s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。
6PGDH活性计算：
活性单位定义 ：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U pr）。
6PGDH酶活性(U prot)
= [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×109]÷(Cpr×V样)÷T
= 535.9×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
△A测定管：A4－A3 ；△A空白管：A2－A1；ε：NADPH摩尔消光系数，6220；d ：比色皿光径，1 cm ； V反总：反应体系总体积，0.001 L；Cpr ：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样 ：反应体系中加入粗酶液体积 ，0.1 mL；T ：反应时间，3 min。
注意事项：
（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融 ；
（2）试剂二和试剂三须现配现用，当天未用完试剂保存在4℃ ，可保存1周 。
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