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阅读次数：15914 发布时间 ：2020/4/27 11:47:06
说明
本试剂盒可用于从血液中分离完整而纯化的线粒体。
其制备物 ，可以被用于细胞凋亡、信号传递 、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。
操作步骤
1. 血液处理 ：
血液要求：非肝素钠抗凝血，使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以线粒体得率会大大减少，并且完整性也会降低 。
a. 对于无核红细胞全血（如哺乳动物处周血） ，取血约5ml（适当分成几管），加入3倍体积的红细胞裂解液（稀释后的工作液,下同），混匀，800 × g 5 min离心收集白细胞。加入1-2ml红细胞裂解液（稀释后的工作液），吹打重悬白细胞 ，合并于一管中，800 × g 5~10 min离心收集白细胞。此时如果白细胞有可见红色，可再次用少量(0.5ml)红细胞裂解液洗细一次 。
b. 对于有核红细胞全血（如禽类全血），取约200-300ul全血，800 × g 5~10 min离心收集全细胞，用生理盐水或者PBS清洗两次 ，留沉淀去上清 。清洗时请用去尖吸头吹打。
2. 在收集到的细胞中，加入1.0 mL冰预冷的白细胞裂解液重悬细胞 ，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨20~40次 ；
3. 匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min ；
4. 取上清 ，加入一新的离心管中，4℃ ，1000× g 再次离心5 min（一共两次离心，完整去核）。
5．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底 ；
6. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL 线粒体清洗液重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min(再次去核）；
7．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
8. 用50 -100μL线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存 。
注意事项
为保证获得完整及尽可能多的线粒体，匀浆条件要示：是全程低温操作。第二是快速。第三，如有条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察 。
一般低温度心机都有离心力显示，如果没有 ，可以用以下公式简单的换算。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示； [rpm] ２即 ：转速的平方； R为半径，单位为厘米。
血液线粒体提取试剂盒新配方升级现货供应
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