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阅读次数：15457 发布时间 ：2023/12/20 15:28:39
如何储存酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)
产品简介 ：
酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织 ，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶 。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜 pH 为 4.5～5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族 ，哺乳动物中其分子量从 18kD 到 100kD 不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型 ，一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是酸性磷酸酶(ACP)水解磷酸苯二钠，产生酚和无机磷，经碱处理后酚能与 4-AAP 反应，产物经氧化生成红色醌类化合物，红色越多说明酸性磷酸酶活性越高 ，反之则酶活性越低 ，通过分光光度比色法测定 510nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平 。该试剂盒主要用于检测血清中前列腺酸性磷酸酶活性，亦可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液 、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料 ：
1 、蒸馏水
2 、离心管或试管
3、恒温箱或水浴锅
4 、96 孔板
5、酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1 、准备样品：
①血浆、血清和尿液样品：血浆 、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定 ，-20℃冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用 PBS 或生理盐水进行适当匀浆，一般细胞数量在 106以上，组织应在 100mg 以上，3000~4000g 离心取上清，-20℃冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
③植物样品：取适量的植物组织加入少量生理盐水或 PBS，充分捣碎或研磨，静置 30min，用纱布或滤纸过滤，4000g 离心 20min，留取上清液并测量体积，-20℃冻存 ，用于酸性磷酸酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶 ，可以使用原有的裂解液或 PBS 等进行稀释，也可以采用 ACP Assay buffer 稀释 。
2、稀释标准品 ：取适量的 Phenol(10mM)和蒸馏水，按下表稀释成 0、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM 、0.5mM。
3、ACP 加样：按照下表设置空白孔 、标准孔 、测定孔 ，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定 ，样品的检测能设置 2 平行孔 ，求平均值。
4、ACP 测定 ：轻轻混匀，室温放置 10min，空白孔调零，酶标仪测定 510nm 处标准孔 、测定孔的吸光度(记为 A 标准 、A 测定)，一般 15min 内检测完毕。
计算：
ACP 活性单位的定义 ：在该实验条件下，每分钟每 ml酶液产生1nmol酚(nmol/ml·min)为一个活性单位 。求平均值，以各标准孔吸光度为纵坐标，相应的酚含量即 ACP 活性(U/L)为横坐标，绘制 ACP 活性单位吸光度值曲线，即为标准曲线。根据测得的各待测样品的吸光度，于标准曲线上查出相应的 ACP 活性单位，乘以稀释倍数后，换算为”nmol/ml·min”的活性单位。
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：
1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂 ，同时需避免反复冻融。
2、 建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
3、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应注意比色杯的*小检测体积 。
4、 所测样品的值高于标准曲线的上限 ，应用 ACP Assay buffer 稀释样品后重新测定。
5、 待测样品中酸性磷酸酶活性较低时 ，可适当延长孵育时间至 30min。
6 、 为了您的安全和健康 ，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期 ：6 个月有效 。常温运输 ，4℃保存 。
如何储存酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)
原创作者 ：南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司
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