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溶菌酶检测试盒说明书
1、自身对照法：适用于样本数量较少，或者样本有混浊或有颜色（如血液红色）；
2、空白对照法：适用于样本量多且样本比较澄清 ；
3 、标准曲线法。
一、测定原理 ：
在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低，透光度增强，故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。
二、试剂组成及配制 (30T/28样)
1、试剂组成：
试剂一：菌粉 ，5mg×4支，2～8℃干燥保存，有效期6个月。
试剂二：菌粉溶剂 ，100ml×1瓶 ，2～8℃保存 ，并每月放微波炉中温消毒20秒，有效期6个月。
试剂三：标准品 ，粉剂2mg×1支（活力为8万单位/mg） ，2～8℃干燥保存，有效期6个月。
[注] ：试剂盒严格按照上述方法保存有效期可延至一年 。
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2、试剂配制 ：
（1）、贮备菌液的配制：
取5mg/支的菌粉1支 ，倒入匀浆管中，加菌粉溶剂1ml，轻轻缓慢上下旋转研磨3分钟（切勿溅出），即为贮备菌液 ，将其取出后置2～8℃冰箱密封保存一周左右 。
（2）、应用菌液的配制：
按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19进行配制，需多少配多少。剩下的应用菌液2～8℃可保存一周左右 。是现用现配，用时摇匀。
（3）、标准品的配制：
①、标准品贮备液的配制：
每支准确加双蒸水1.0ml配成2mg/ml的标准品贮备液。2～8℃可保存7～10天。
②、标准品应用液的配制：
临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶799比例稀释成2.5μg/ml（即200U/ml）的标准品应用液 ，需多少配多少 。2～8℃保存 ，可保存7～10天 。
附录Ⅰ ：自身对照法测定溶菌酶
（适用于样本数量较少，或者样本有混浊或有颜色，如血液红色）
[注]：本法用分光光度计530nm处,1cm光径比色皿测得是样本或标准的透光度值
1 、操作步骤
①、将配制好的应用菌液 ，标准应用液及所需检测的样本均放入37℃水浴箱中预温5分钟
以上。使菌液 ，标准液及检测样本的温度达到37℃。
②、将可见分光光度计于530nm处,1cm光径比色皿,以双蒸水调透光度100% (比色皿准备两只,一只用于调透光度100%,一只用于测定)。
③ 、往相应编号的试管中加入0.2ml待测样本，取2ml应用菌液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。(标准品应用液取0.2ml双蒸水,加入2ml应用菌液,其它操作与测定相同)
④、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计530nm处比浊 ，5秒时读取透光度值T0, 比色皿不要取出，在2 分5秒时读取透光度值T2 ；
[注]：如5秒时来不及读数，可20秒时读取调透光度值T0,在2 分20秒时读取透光度值T2，标准管需同样操作。
⑤ 、求出2次透光度的差值（△T= T2-T0）。
[注] ：用同一比色皿每检测一个样本后均要用双蒸水冲洗干净，才可再放第二个样本或标准品应用液。
2 、计算公式： 52134[][][]20[][]20/2.5/200/UTUTgmlSTSTgmlUmlμμ−=×−注注注注注溶菌酶含量样本测试前标准品浓度测定透光度测定透光度（）稀释倍数标准透光度标准透光度（即）
[注1]：UT0为测定管加应用菌液反应5秒钟时的透光度。
[注2]：UT2为测定管加应用菌液反应2分零5秒时的透光度 。
[注3]：ST0为标准管加应用菌液反应5秒钟时的透光度 。
[注4] ：ST2为标准管加应用菌液反应2分零5秒时的透光度。
[注5] ：2.5μg/ml即200U/ml即1μg = 80U
注意事项
1、菌粉尽量研磨碎、磨匀 ，研磨时防止菌液溅出。
2、菌液、标准品、样本必须先在0℃冰水浴中预冷5分钟以上 。37℃水浴前的操作在冰水浴中进行。
3、为了避免检测误差 ，空白管单独用一个比色皿比色 ，每次加样前或比色之前比色杯要先用自来水冲洗干净，再用双蒸水冲洗2～3遍。
4、比色时各管从冰水中逐个取出比色。比色皿过冷会在皿壁上形成水雾，所以要擦干再比色 。
5、试管要用同一批次。
6、为了减少误差1cm光径的比色皿也要进行校正。
7、比色与计时要同步，准确控制时间。为二个人或者用自动生化分析仪。
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