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阅读次数 ：844 发布时间：2022/2/16 15:33:55
5357cc拉斯维加斯首页入口生物提供实验外包服务，一站搞定 ！WB实验原理 ：
Western Blot是分子生物学 、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白，经转膜 、封闭后目标蛋白与特有性一抗结合，再与辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体起反应，经过底物显色 ，分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况。该法结合了凝胶电泳和固相免疫测定两种技术的高特异性和高敏感性，可以对目标蛋白进行定型和半定量的分析 。
实验流程：1、客户提供样本及靶蛋白抗体，2、蛋白样本抽提及定量，预实验：上样电泳、转模、封闭、抗体孵育显色，3、确定*佳上样量以及抗体稀释比列，4、正式试验：上样电泳、转模、封闭、抗体孵育显色 ，5、胶片灰度分析数据处理。
elisa实验原理：
酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay ，ELISA) ，是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术 。基本原理是：1）使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 。2）使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体 ，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由于酶的催化频率很高 ，故可放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度 。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应 ，再用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，*后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例 。加入酶反应底物后 ，底物被酶催化为有色产物 ，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据反应后颜色的深浅进行定性或定量分析。
温馨提示：
造成ELISA测定结果不正常的因素主要有：
1）标本因素：样本需新鲜采集，防止污染，且准确稀释至适当的倍数。
2）试剂因素：ELISA试剂盒在保质期内，其他试剂如蒸馏水的水质等。
3）操作因素 ：注意操作细节，如加样不可太快，避免加在孔壁上 ；洗板过程中注意洗液不能溢出孔外 ；显色要注意控制时间等。
常用的免疫学检测方法ELISA和WB的区分有哪些？
| 区分项目 | ELISA | WB |
| 目的 | 不仅可以检测抗原还可以检测抗体 ，对其进行定性和定量分析 。 | 定性分析，对胶片灰度值进行半定量分析 。 |
| 抗体识别位点 | 线性化或构象型位点均可 。 | 线性化位点。 |
| 优点 | 96 孔板可以处理多个样本，通过设置复孔 ，对照 ，梯度可提高数据的可信度，且灵敏度高于WB。 | 可明确蛋白的分子量大小，以及是否为多聚体或发生降解。 |
| 缺点 | 如果抗体有非特异性结合，得到的数值则不可信。 | 一次电泳*多处理10-20 个样本 。 |
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