高尔基染色(包含扫描)5357cc拉斯维加斯首页入口生物给您一步到位Golgi-Cox浸染法是研究神经元和胶质细胞正常和非正常形态*有效的方法。使用Golgi技术,在药物处理过的动物脑中和因神经疾病死亡的病人脑中发现了神经树突和树突微小的形态改变。
实验流程:
组织固定-组织块整体染色-脱水-切片封片-显微镜镜检
结果判读:
神经元细胞、胶质细胞、神经树突棘呈黑色,背景淡黑色或无色
送样运输要求:
样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。
切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
实验步骤
明胶硫酸铬钾混合液(放置4℃条件下可保存3个月)
明胶玻片制作:将明胶硫酸铬钾混合液至于37℃加热呈液体状(不能摇动该溶液,溶液中若形成小气泡,后续制片过程中会造成玻片上残留有很多小颗粒),普片浸入该液体几秒后拿出,置于铁架上于37℃烤箱烘干即可,干燥阴凉通风处保存。
1、取材:将老鼠杀死后,立刻取脑组织置于固定液中固定48h以上。
2、高尔基染色:根据需要观察的组织部位将大鼠脑组织切成2-3mm厚的组织块,用生理盐水将脑组织轻轻漂洗几遍,置于45ml的圆底EP管中,加入高尔基染液将脑组织完全浸没,放置阴凉通风处避光处理14天(浸泡48h后,换一次新染液,之后每隔3天换一次新染液,共计14天)。
3、组织处理:蒸馏水浸洗3次,倒入80%的冰醋酸浸没组织,过夜,待组织变软后蒸馏水洗,置于30%的蔗糖中。
4、切片:用振荡切片机将组织切成100微米,贴在明胶玻片上,过夜避光晾干。
5、显影定影:将晾干后的组织玻片以浓氨水处理15min,蒸馏水洗1min,酸性坚膜定影液处理15min,蒸馏水洗3min,晾干,甘油明胶封片。
6、显微镜镜检,图像采集分析;可用数字切片扫描仪全景多层扫描得到脑组织全景图像。
结果判读:
神经元呈黑色,胶质细胞呈黑色,背景灰白色或无色。
注意事项:
1、高尔基染液有剧毒,需要穿戴实验服和一次性手套操作实验;
2、染色过程中的每一步都需要严格避光。
3、高尔基染液放置阴凉通风避光处常温保存即可;定影液18℃-20℃避光通风处保存。