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公司新闻

2023产品更新-改良Lowry法蛋白定量试剂盒

阅读次数 :720    发布时间 :2023/1/6 15:27:55

 2023产品更新-改良Lowry法蛋白定量试剂盒

描述 :
Lowry法蛋白定量应用Folin-酚试剂法原理如下:在碱性条件下,蛋白质与铜离子作用生成蛋白质-铜络合物,此络合物将Folin试剂还原 ,生成深蓝色物质,其颜色深浅与蛋白含量成正比,线性范围5~500ug/ml。Lowry法蛋白定量显色反应主要与样本中的酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸含量相关 ,样品中含有酚类、柠檬酸和巯基化合物等可对反应产生干扰。此外,待测样本也会因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。

 
组成:
(1000次)
Folin 酚 A 100ml×2  室温
Folin 酚 B   5ml       室温
Folin 酚 C   20ml      室温
R1           30ml      室温
BSA蛋白标准品(5mg/ml) 1ml   -20℃
以上试剂按要求温度保存 ,有效期至少一年。

 
注意:试剂开封使用后请及时密闭保存,R3试剂颜色变成深绿色即失效。

 
所需设备 :
比色计 、酶标仪或微板比色仪,*佳工作波长650nm 。

 
操作步骤:
1.根据样本量,取适量Folin酚A和B按50:1混合,混合后24小时有效。
2.根据样本量 ,取适量BSA标准品用R2稀释10倍至浓度0.5mg/ml。
3.将标准品按 0、2、4 、6、8、12、16、20ul加到96孔板中,加PBS补足至20ul。
4.将样品作适当稀释(多做几个梯度),加20ul到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点误差比较大 ,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.各孔加入配好的Folin酚A+B试剂200ul ,混匀,室温静置10分钟。
6.各孔加入20ulFolin酚C试剂,迅速混匀 ,37℃孵育30分钟。酶标仪测定A650 OD值,绘制标准曲线,计算蛋白浓度。
 

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