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当前位置:南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司>产品中心>科研血清 > 裂解枸橼酸钠抗凝的兔血
点击次数：319 发布时间：2025/3/18 15:14:32
裂解枸橼酸钠抗凝的兔血样本需根据实验目的选择合适方法，以下是分步指南及注意事项：
一、明确裂解目的
红细胞裂解（如分离白细胞或提取血浆成分）
全血细胞裂解（如提取DNA/RNA/蛋白质）
特定成分提取（如细胞膜蛋白 、细胞质内容物）
二 、实验前准备
试剂与材料：
红细胞裂解缓冲液（如NH?Cl溶液：155 mM NH?Cl + 10 mM KHCO? + 0.1 mM EDTA，pH 7.2-7.4）
全血裂解试剂（如Triton X-100、SDS、蛋白酶抑制剂）
PBS缓冲液（用于洗涤）
离心机、移液器 、离心管等。
安全防护 ：戴手套 、护目镜，避免直接接触血液。
三、裂解步骤
情况1：红细胞裂解（分离白细胞）
稀释血液：
用PBS或生理盐水将抗凝血稀释1-2倍（降低细胞密度）。
加入裂解缓冲液：
按1:3-1:10（血样:裂解液）比例混合，冰上孵育5-15分钟（兔红细胞较脆弱，时间不宜过长） 。
终止裂解：
加入等量PBS或培养液稀释，离心（400×g, 5分钟）去除裂解的红细胞碎片。
洗涤白细胞：
重悬细胞沉淀于PBS，重复离心1-2次 。
情况2 ：全血细胞裂解（提取核酸/蛋白）
直接裂解：
加入含Triton X-100（1%）或SDS（0.1-1%）的裂解液，涡旋混匀 。
冰上孵育10-30分钟（根据实验需求调整时间）。
中和/纯化 ：
若需提取RNA/DNA ，可加入蛋白酶K（56℃消化过夜）。
使用试剂盒（如酚-法或商业试剂盒）纯化核酸。
情况3：其他方法
低渗裂解 ：用蒸馏水稀释血液至0.2-0.5×渗透压 ，冰上静置至红细胞破裂（需快速操作以避免白细胞损伤） 。
反复冻融：液氮速冻后37℃解冻，重复3-5次（适用于粗提蛋白）。
四 、注意事项
抗凝剂影响 ：
枸橼酸钠螯合Ca??，若后续实验需Ca??（如酶活性测定），需在裂解前用CaCl?中和（终浓度1-5 mM）。
兔血特性：
兔红细胞较人红细胞更易裂解，需控制裂解时间避免白细胞损伤 。
下游实验兼容性：
若进行PCR/qPCR ，避免使用含EDTA的裂解液（抑制Taq酶活性）。
提取蛋白时需添加蛋白酶抑制剂。
废弃物处理：按生物安全规范处理含血液样本的废液。
五 、常见问题
裂解不完全 ：延长孵育时间、增加裂解液比例或调整温度。
白细胞损失：优化离心速度（避免过高g值破坏白细胞）。
蛋白/核酸降解：全程冰上操作，添加酶抑制剂 。
根据具体需求调整步骤 ，建议先用少量样本预实验优化条件。
更新时间 ：2025/4/25 14:34:35
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